Udostępniamy nagranie webinaru poświęconego metodologicznym wyzwaniom w mikroskopii fluorescencyjnej. Prowadzący koncentruje się na identyfikacji źródeł błędów eksperymentalnych oraz optymalizacji protokołów badawczych dla kultur komórkowych i tkankowych.
Materiał przygotował i przedstawił Ekspert Merytoryczny Fundacji TYGIEL dr Dawid Wnuk z Zakładu Biologii Komórki Wydziału Biochemii, Biofizyki i Biotechnologii Uniwersytetu Jagiellońskiego w Krakowie.
W trakcie 90-minutowego wykładu omówione zostały cztery kluczowe obszary problemowe: swoistość sygnału, wpływ barwników na fizjologię komórki, fotofizyka (fotoblaknięcie, fototoksyczność) oraz preparatyka próbki.
Program webinaru:
-
Barwienia przyżyciowe organelli:
-
Analiza markerów dla mitochondriów (rodzina MitoTracker, potencjał błonowy), lizosomów (wpływ pH na specyficzność sygnału), siateczki śródplazmatycznej oraz aparatu Golgiego.
-
Wpływ warunków hodowli (temperatura, CO2) na wiarygodność obrazowania.
-
Wskaźniki funkcjonalne:
-
Metodyka pomiaru stężenia jonów wapnia i potencjału mitochondrialnego (m.in. barwniki JC-1, TMRE).
-
Interpretacja wyników i unikanie artefaktów wynikających z nieprawidłowego stężenia fluoroforów.
-
Ocena żywotności komórek:
-
Porównanie testów integralności błony komórkowej (PI, 7-AAD) z testami metabolicznymi (Calcein AM, FDA).
-
Ryzyko wyników fałszywie dodatnich i ujemnych w zależności od kondycji metabolicznej komórek.
-
Immunofluorescencja (komórki utrwalone):
-
Przyczyny wysokiego tła i niespecyficznego wiązania przeciwciał.
-
Znaczenie doboru utrwalacza, procedury blokowania oraz technik płukania dla jakości preparatu.
Dla kogo przeznaczony jest materiał:
Nagranie adresowane jest do biologów, biotechnologów i pracowników laboratoriów badawczych, którzy wykorzystują mikroskopię fluorescencyjną w codziennej praktyce i poszukują rozwiązań dla powtarzalnych problemów technicznych.